طرز تهيه محلولهاي پايه(MS(stock:

عناصر پرمصرف يا ماکروالمنت ها:

محلول پايه عناصر پرمصرف 10 برابر غلظت تهيه مي شود. که طرز تهيه استوک آن به شرح ذيل است.

ابتدا مقدار هر نمک را جداگانه با توجه به جدول به ميزان 10 برابر غلظت توزين کرده و در داخل بالن ژوژه 250 cc با آب مقطر حل کرده و به حجم مي رسانيم.به همين ترتيب ساير نمک ها را وزن کرده و پس ازحل شدن در آب به حجم مي رسانيم . 

عناصر کم مصرف يا ميکرو المنت ها:

محلول پايه عناصر کم مصرف 100 برابر غلظت تهيه مي شود. بدين ترتيب که هر نمک را جداگانه وزن کرده و با آب مقطر حل کرده و در پايان محتويات تمام بشرهاي حاوي نمک ها را به بالن ژوژه 250 cc منتقل کرده و با افزودن آب مقطر به حجم مي رسانيم. 

تنظيم کننده هاي رشد:

محلول پايه تنظيم کننده هاي رشد 10 برابر غلظت تهيه مي شود. که در اينجا هورمون IBA را وزن کرده در مقداري سود حل کرده و سپس در بالن ژوژه 100 CC ريخته و سپس به حجم مي رسانيم. براي هورمون BA نيز به همين ترتيب عمل کرده و در بالن ژوژه جداگانه به حجم مي رسانيم.

ويتامين ها:

محلول پايه ويتامين ها 10 برابر غلظت تهيه مي شود. به اين ترتيب که ابتدا هر يک از ويتامين ها را جداگانه وزن کرده و در آب مقطر حل ودر بالن ژوژه 100cc ريخته و به حجم مي رسانيم. 

 

 

آهن:

ابتدا Na2EDTA , FeSo4.7H2o,جداگانه وزن کرده و Na2EDTA را داخل يک بشر حاوي آب مقطر روي استيرر گذاشته تا به جوش آيد سپس FeSo4.7H2o را اضافه کرده و براي محلول سازي آماده است.

 

کشت بافت هويج: 

ابتدا هويج ها را پوست کنده و عمل شستشو را با آب مقطر انجام مي دهيم. به قطعات بزرگ تقسيم مي کنيم. از طرف ديگر سطح هود را با الکل ضدعفوني کرده وسايل مورد نياز مثل پتريديش، بشر و ظروف حاوي محيط کشت و.... سطح خارجي را ضدعفوني کرده و زير هود مي گذاريم. دست ها را با الکل ضدعفوني کرده و بعد در زير هود شروع به استريل کردن نمونه ها مي پردازيم. ابتدا هويج ها را به مدت 1-2 دقيقه در الکل 70 درصد قرار مي دهيم پس از خارج کردن در هيپوکلريت سديم (نسبت1به 5 ) به مدت 15 دقيقه قرار مي دهيم. بعد به مدت 5 دقيقه در آب مقطر سپس خارج کرده و در آخر به مدت 10 دقيقه مجدداً در آب مقطر قرار مي دهيم.

کشت قطعات تک گره ساقه رز:

ابتدا به وسيله قيچي باغباني از قسمت انتهايي ساقه هاي بزرگ تر و جوان تر رز راکه نبايد خشبي باشد جدا مي کنيم . از طرف ديگر سطح هود را با الکل ضدعفوني کرده وسايل مورد نياز مثل پتريديش، بشر و ظروف حاوي محيط کشت و.... سطح خارجي را ضدعفوني کرده و زير هود مي گذاريم. دست ها را با الکل ضدعفوني کرده و بعد در زير هود شروع به استريل کردن نمونه ها مي پردازيم. ابتدا ساقه هاي 3-2 حاوي جوانه را به مدت 1دقيقه در الکل 70 درصد قرار مي دهيم. پس از خارج کردن در هيپوکلريت سديم (نسبت1به 5 ) به مدت 10 دقيقه قرار مي دهيم. بعد به مدت 5 دقيقه در آب مقطر سپس خارج کرده و در آخر به مدت 10 دقيقه مجدداً در آب مقطر قرار مي دهيم.سپس در داخل پتريديش( ضدعفوني) از نمونه 1-5/0 سانتي متر از بالا و پايين گره برش مي زنيم و در داخل محيط کشت به طوري که جوانه خارج از محيط کشت و همان شکلي که روي ساقه مادري است قرار مي دهيم. 

 

طرز تهيه محيط کشت نهايي:

براي تهيه 500CC محيط کشت ابتدا در يک ارلن 100 CC آب مقطر مي ريزيم و سپس از هر يک از 5 ماکرو 5/12 CC برداشته داخل بالن ژوژه ريخته و بعد از ميکرو ها 25/1 CC برداشته و به همين ترتيب هورمون IBA 5 CC , BA5/2 CC، ويتامين ها هر کدام 5CC ،ميواينوزيتول50 ميلي گرم، ساکارز12 گرم، Na2EDTA 3/37 گرم، , FeSo4.7H2o 8/27 گرم پس از افزودن کليه اجزاي محيط کشت ، حجم محلول با اضافه کردن آب مقطر به يک ليتر مي رسد. آنگاه پس از کاليبره کردن دستگاه pH متر ، pH محيط کشت با افزودن چند قطره سود يا اسيد کلريدريک يک نرمال تنظيم مي شود . پس از تنظيم pH مقدار 4 گرم آگار مورد نظر را وزن کرده و به ارلن اضافه مي گردد.